Primo Esperimento
Esperimento di congelamento e scongelamento di
cellule
Durante l’esperienza in laboratorio abbiamo congelato le HL60
per potere bloccare la linea cellulare. Prima abbiamo preparato
l’apposito terreno di congelamento a cui oltre ai componenti
del normale terreno di coltura è stato aggiunto DMSO, un
crio protettore per permettere la formazione di ghiaccio amorfo.
Dopo aver contato le cellule e dopo la centrifuga a 200 g per 5 minuti,
è stato eliminato il surnatante e il pellet è
stato sospeso nel terreno di congelamento. Però non ha
raggiunto la concentrazione richiesta (800.000 cell/mL)
poiché il numero delle mie cellule era inferiore. Ho riposto
le cellule in un criovial ed esse sono state riposte a
– 20° per poi passare a –
80° fino a raggiungere – 196°,
temperatura azoto liquido.
Il primo giorno sono state scongelate le cellule SaOS. Dopo aver
prelevato le cellule dall’azoto liquido, le abbiamo immerse
nel bagno d’acqua a 37°C. In seguito le abbiamo
passate con alcool al 70%. Poi abbiamo diluito con 9 mL di
terreno completo, messo prima in una Falcon da 15 mL in cui poi abbiamo
messo anche le cellule. Esse poi sono state centrifugate a
200g per 5 min e una volta eliminato il surnatante abbiamo
sospeso il pellet con 5mL di terreno poi riposto le cellule in fiasca.